PCR實驗(yàn)室在臨(lín)床上又(yòu)稱基因(yīn)擴(kuò)增實(shí)驗室。理想的(dí)的標(biāo)準(zhǔn)PCR設計(jì)組合式(shì)實驗(yàn)室包括(kuò)4個(gè)分區(qū)，分別(bié)是(shì):試(shì)劑儲存和(hé)準備(bèi)區，標本製(zhì)備區(qū)，擴增反(fǎn)應混(hùn)合物(wù)配製(zhì)和擴增區，擴增(zēng)產物(wù)分(fēn)析(xī)區，分(fēn)區及其儀器設(shè)備配置(zhì)參見下圖。

　　普通的 PCR 儀對標本擴增後(hòu)，需再經電泳或(huò)雜(zá)交實(shí)驗(yàn)分析，才(cái)能判斷標本含(hán)有(yǒu)哪(nǎ)種(zhǒng)細(xì)菌(jūn)，病毒。

　　如果(guǒ)使(shǐ)用全自動分析(xī)儀如實時(shí)熒光(guāng)定量(liáng)PCR儀，由於擴增與(yǔ)分析(xī)集(jí)成在一台儀器內進行，故(gù)擴增區與(yǔ)分(fēn)析區(qū)合並為一(yī)， PCR 實(shí)驗(yàn)室隻需設(shè)置3個房間。PCR 兩(liǎng)種(zhǒng)分(fēn)區及(jí)其配置(zhì)置參(cān)見下(xià)圖(tú) 。

　　PCR實驗室各(gè)區(qū)主要功能及(jí)相(xiāng)關(guān)要求描述:

　　試劑(jì)儲存和準(zhǔn)備區(qū)(I區);儲(chǔ)存(cún)試(shì)劑的製(zhì)備，試(shì)劑(jì)的(dí)分(fēn)裝和(hé)主反應(yīng)混合液(yè)的(dí)製備(bèi)，可配置(zhì)電泳溶液。試(shì)劑(jì)配置在潔淨台(tái)內(nèi)操(cāo)作(zuò)，一般采用 900mm 的垂直單向流潔淨(jìng)台。冰箱(xiāng)一般(bān)為4℃冷(lěng)藏櫃。

　　標本製備區(qū)(Ⅱ區):主要(yào)是核(hé)酸(suān)(RNA，DNA)的提取(qǔ)和純化，包括(kuò)臨床(chuáng)標(biāo)本的保(bǎo)存(cún)，核(hé)酸(suān)儲存(cún)，核酸加(jiā)人到擴增(zēng)反應(yīng)管(guǎn)，cDNA的合成。核(hé)酸(suān)提取(qǔ)時(shí)需(xū)使用(yòng)苯酚，氯(lǜ)仿等(děng)有毒(dú)致癌(ái)物(wù)，高速(sù)離心後(hòu)得到沉(chén)澱(diàn)的(dí) DNA。PCR反應的*大特(tè)點是(shì)具(jù)有較大的(dí)擴(kuò)增能力(lì)與極(jí)高的靈敏性，但也正(zhèng)是這種(zhǒng)特點，使得(dé)極(jí)其微(wēi)量的汙(wū)染即可造(zào)成假(jiǎ)陽性(xìng)的檢(jiǎn)測(cè)結(jié)果(guǒ)，因此核酸的純(chún)化操作應(yīng)生(shēng)物安(ān)全櫃(guì)內進(jìn)行，為避免(miǎn)提取核(hé)酸氣(qì)溶(róng)膠(jiāo)在(zài)櫃(guì)內反復(fù)循環(huán)，造(zào)成標本間交叉(chā)汙(wū)染，出現(xiàn)假(jiǎ)陽性結(jié)果，*好采用全外排的ⅡB2生物(wù)安全櫃。標本及 DNA需在一20℃或-80℃的(dí)低(dī)溫冰箱中(zhōng)保存(cún)。處理大分子 DNA時使用超聲波(bō)水(shuǐ)浴儀(水(shuǐ)浴(yù)鍋)。房間(jiān)相對(duì)於(yú)鄰(lín)近區域(yù)為正(zhèng)壓，以避免(miǎn)從(cóng)鄰近(jìn)區進入的氣(qì)溶膠汙染。

　　擴(kuò)增反應混(hùn)合物配製(zhì)和(hé)擴(kuò)增區(Ⅲ區(qū)):主要(yào)進(jìn)行的操(cāo)作為 DNA 或 cDNA 擴(kuò)增。巢式PCR 測定(dìng)中(zhōng)，通(tōng)常在第一輪擴(kuò)增後必(bì)須打(dǎ)開反應(yīng)管(guǎn)，因(yīn)此巢式擴(kuò)增有較高(gāo)的(dí)汙(wū)染(rǎn)危(wēi)險(xiǎn)性，第(dì)二(èr)次(cì)加樣(yàng)必須(xū)在(zài)本(běn)區潔淨(jìng)台內進行(háng)。房(fáng)間(jiān)相(xiāng)對(duì)於產物(wù)分析區應(yīng)為(wéi)正壓，相對於標本製備(bèi)區為(wéi)負(fù)壓。

　　擴(kuò)增(zēng)產(chǎn)物分(fēn)析(xī)區(qū)(Ⅳ區(qū)):對(duì)擴增(zēng)後的(dí)產物(wù)種(zhǒng)類進(jìn)行分析，判(pàn)斷是哪種細菌，病(bìng)毒。對(duì)於普通(tōng)的(dí)PCR 儀，目(mù)前*常用的(dí)方法(fǎ)是電(diàn)泳分析(xī)。為(wéi)防止分(fēn)析產物(wù)汙染(rǎn)其(qí)他(tā)區域，房(fáng)間(jiān)應為負壓。設(shè)備(bèi)中(zhōng)電(diàn)熱(rè)板(bǎn)額定功率1~4kw，發(fā)熱(rè)量較(jiào)大。

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